病毒载体构建服务包含慢病毒、腺相关病毒、腺病毒和逆转录病毒载体等,构建内容包括基因过表达载体构建、基因定点突变表达载体构建、用于基因沉默的shRNA设计与构建、microRNA表达与封闭载体设计与构建、萤光素酶报告基因载体构建(UTR、启动子及其它功能序列)以及Cre-LoxP系统和CRISPR/Cas9基因编辑工具载体设计与构建等,力求一站式解决基因功能研究中的基因上调和基因下调需求。
质粒优势:
①表达时间快,导入细胞后约24小时可观察到目的基因表达;
②构建技术简单,成本低。
③和元的过表达载体库丰富,并且过表达的标记丰富
荧光标记:GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…
标签标记: FLAG、 HA 、Myc、His tag…
抗性标记:Puro、Neo、Hygro、BSD…
局限性:
①转染试剂具有细胞毒性,使用后影响细胞状态;
②大部分细胞较难转染,达不到基因操作目的;
③质粒不整合到细胞基因组,只能进行短时间的瞬时表达,无法进行观察周期较长的实验。
由于单纯质粒存在一定的局限性,根据实验需要需包成病毒进一步满足不同实验的需求。
不同表达载体的区别
表达系统 |
真核表达载体 |
慢病毒载体 |
重组腺相关病毒载体 |
重组腺病毒载体 |
载体基因特性 |
双链DNA质粒 |
RNA逆转录病毒 |
单链DNA病毒 |
双链DNA病毒 |
外源基因表达时间 |
24h开始表达,持续3-7天 |
2-4天开始表达,长时间稳定表达 |
7-14天开始表达 |
1-2天开始表达 |
插入片段大小 |
8kb左右 |
4kb左右 |
2.8kb左右 |
6kb左右 |
稳定细胞株筛选 |
难操作 |
可以 |
不可以 |
不可以,瞬时表达 |
细胞实验 |
细胞系,部分转染效率低 |
首选,广谱,感染效率高 |
不适合 |
广谱,感染效率高 |
动物实验 |
不适合 |
适合,根据观察时间和注射部位 |
首选,根据观察时间和注射部位 |
免疫原性高,慎选 |
滴度范围 |
无 |
108~109TU/ml |
1012-1013vg/ml |
1010-1011pfu/ml |